哺乳动物细胞基因编辑_苏州必威生物科技股份有限公司

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哺乳动物细胞基因编辑

CRISPR-Cas9基因编辑技术的出现为哺乳动物模型构建提供了简便、快速的方法，也为基因疾病的治疗提供新思路、新方法。必威生物继质粒DNA后全新推出CRISPR RNP介导的细胞基因编辑服务：平台依托先进的技术和经验丰富的科研团队，为您打造从方案设计、sgRNA设计及化学合成、高活性重组Cas9蛋白，RNP复合物组装到敲除细胞系构建的全流程服务。

服务优势

全模式物种CRISPR sgRNA设计
sgRNA化学合成纯度高达99%以上
重组Cas9蛋白纯度高达99%以上
最快至2周交付

服务详情

服务项目	交付内容	交付周期
方案设计	专业的分析报告设计序列	咨询
合成与组装	化学合成修饰化的sgRNA 高活性、高纯度的Cas9蛋白 RNP复合物组装	咨询
敲除细胞系构建	多克隆细胞群或单克隆细胞株提供细胞基因型复检、扩增及冻存	咨询
验证	DNA水平检测蛋白水平检测	咨询

在线咨询

服务流程

案例分享查看详细

1、利用RNP下的双sgRNA编辑法，实现基因DNA水平片段敲除
案例：对X细胞的A基因进行Exon1-13的片段敲除（KO）
（1）在需求敲除片段两端分别设计1条高靶向的sgRNA序列，如下图：
gene KO

（2）将gRNA-A1、gRNA-A2进行化学修饰合成后分别与Cas9蛋白组装成RNP，转染至X细胞进行A基因片段序列敲除；

（3）敲除结果检测如下：
DNA水平-Sanger测序显示，A基因序列已被敲除，结果如下：

细胞表型检测如下图：A为正常细胞，B为A基因敲除后的突变细胞形态，表明A基因被敲除。
RNP基因敲除

2、RNP敲除效率远超传统质粒法
案例：以AAVS1位点敲除为例，比较质粒（DNA）与RNP的敲除效率
（1）将AAVS1-sgRNA1序列构建带有Cas9的载体中，转染细胞后提取基因组DNA，以基因组DNA为样本进行Sanger测序并结合Synthego ICE分析软件检测，结果显示敲除率为14%；