案例一分析:CRISPR-Cas9技术敲除酵母菌ADE1基因
必威生物利用CRISPR-Cas9技术编辑酵母菌中的一个920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相关基因,如果ADE1失活,则细胞将会积累红色色素,呈现红色菌落。
阳性克隆菌落
测序结果显示,转化子的ADE1基因缺失了18个碱基,被成功编辑。
案例二分析:CRISPR-Cas9技术将荧光蛋白基因敲入大肠杆菌
必威生物研究人员通过开发完善CRISPR-Cas9双质粒基因编辑系统及其生产工艺,成功将906bp的红色荧光蛋白(mScarlet)编码基因敲入到菌株E.coli的NC101基因组上 Clbp编码区域,敲入成功率高达96.6%~100%。
图1 mScarlet基因敲入后克隆子的PCR鉴定电泳图
图2 mScarlet基因敲入后大肠杆菌基因组序列。(a)敲入位点上下游基因图谱及测序组装示意图,(b)敲入位点上下游测序序列峰形图。
图3 荧光显微镜下大肠杆菌NC101突变株细胞图像。(a)白光下细胞图片,(b)594 nm光源激发后细胞图片。